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在第四阶段,我们会扭转我们最初的交联蛋白,DNA,其次是
纯化的DNA。开始通过采取每个IP的样品,以及输入样值的
没有经过前面的IP步骤,并添加8微升5摩尔浓度
氯的200微升的样品,然后由涡旋。
孵育15分钟,在95摄氏度。为了净化每一个样品,我们将使用一种DNA结合硅胶柱
制造商的说明。首先每个样品添加适量
涡DNA结合缓冲液中,然后将每个样品放置在一个一列
收集管中。列在15,000 g离心1分钟。
丢弃从收集管流经DNA洗涤缓冲液中,并添加到每个列。
离心列15000克一分钟。从收集管丢弃流过
和旋转的空列在两分钟内,以确保15000克确保它们完全干燥。
丢弃旧的收集管,将纯化柱到一个新的干净的试管。
DNA的洗脱缓冲液中加入50微升膜直接在列中。
允许坐上一分钟,然后在15000克进行最后的旋转1分钟。
丢弃纯化柱纯化的DNA保存在零下20摄氏度,直到准备的最后阶段。